De grootste verschil tussen nitrocellulose en nylonmembraan is dat de nitrocellulosemembraan heeft een hoge affiniteit voor eiwitbinding, terwijl het nylonmembraan een hoge affiniteit heeft voor nucleïnezuurbinding. Bovendien binden hydrofobe en elektrostatische interacties macromoleculen aan de nitrocellulosemembranen, terwijl ionische, hydrofobe en elektrostatische interacties macromoleculen aan de nylonmembranen binden.

Nitrocellulose en nylonmembraan zijn twee soorten membranen waarnaar de macromoleculen van de gel worden overgebracht. Nitrocellulosemembranen kunnen echter ook worden gebruikt om DNA en RNA te binden.

Affiniteit, Biodyne A, Biodyne B, Nitrocellulose, Nucleïnezuren, Nylon, Poriëngrootte, Eiwitten

Wat is een nitrocellulosemembraan?

Nitrocellulosemembraan is een veel voorkomende matrix die wordt gebruikt bij Western-blotting vanwege de hoge eiwitbindingsaffiniteit. Het kan echter worden gebruikt om nucleïnezuren te detecteren, behalve geïmmobiliseerde eiwitten en glycoproteïnen. De immobilisatie van de macromoleculen gebeurt voornamelijk door hydrofobe interacties. Waterstofbindingen worden ook gevormd tussen de nitrogroepen van het membraan en de aminozuurzijketens van de eiwitten. Eiwitimmobilisatie zal hoog zijn in de hoge zout- en lage methanolconcentraties.

Figuur 1: Principe van Blot

Nitrocellulosemembranen zijn verkrijgbaar in 100% zuivere vormen van nitrocellulose met een groot oppervlak dat uniform is. De beschikbare voorformaten zijn 0,2 m en 0,45 m. De kleine poriegrootte is beter voor de binding met kleine eiwitten (<14 kDa). Het bindings- en vasthoudvermogen van eiwitten is 80-250 g/cm². De voorgemonteerde membranen zijn klaar voor gebruik. Een van de belangrijkste voordelen van nitrocellulosemembranen is de zeer lage achtergrond omdat deze gemakkelijk kan worden geblokkeerd. De ondersteunde nitrocellulosemembranen kunnen worden gestript en opnieuw worden onderzocht.

Wat is een nylon membraan?

Nylon membraan is een veelgebruikte matrix voor de binding van nucleïnezuren. Nylon membranen zijn mechanisch sterker dan nitrocellulosemembranen. De twee belangrijkste soorten nylonmembranen die bij blotting worden gebruikt, zijn Biodyne A en Biodyne B. De poriegrootte van beide typen is 0,45 m. Ze zijn bestand tegen hitte en oplosmiddelen. Ook zullen ze niet krimpen, barsten of scheuren. Beide geven een lage achtergrond dan nitrocellulosemembranen.

Figuur 2: Southern Blot-membraan

Overeenkomsten tussen nitrocellulose en nylonmembraan

Verschil tussen nitrocellulose en nylonmembraan

Definitie

Nitrocellulosemembraan verwijst naar een kleverig membraan dat wordt gebruikt voor het immobiliseren van nucleïnezuren en eiwitten bij blotting, terwijl nylonmembraan verwijst naar een type membraan met hoge sterkte en hittebestendigheid dat wordt gebruikt om macromoleculen te immobiliseren.

Gemaakt van

Nitrocellulosemembranen zijn gemaakt van genitreerde cellulose, terwijl nylonmembranen zijn gemaakt van ongemodificeerde of positief geladen Biodyne A en Biodyne B nylon.

Porie grootte

De poriegroottes van nitrocellulosemembranen zijn 0,2 m en 0,45 m, terwijl de poriegrootte van de nylonmembranen 0,45 m is.

Kracht

Nitrocellulosemembranen zijn broos en dus niet herbruikbaar, terwijl nylonmembranen mechanisch sterk zijn.

Overdrachtsmethode:

Elektroforetische overdracht wordt voornamelijk gebruikt bij de overdracht van eiwitten op de nitrocellulosemembranen, terwijl capillaire overdracht de gebruikelijke praktijk is bij nylonmembranen.

Affiniteit

Nitrocellulosemembranen hebben een hoge affiniteit voor eiwitten, terwijl nylonmembranen een hoge affiniteit hebben voor nucleïnezuren. Nitrocellulosemembranen kunnen ook worden gebruikt voor nucleïnezuren.

bevlekken

Nitrocellulosemembranen zijn beter voor Western-blotting, terwijl nylonmembranen beter zijn voor Southern- en Northern-blotting.

Bindende interacties

Hydrofobe en elektrostatische interacties binden macromoleculen aan de nitrocellulosemembranen, terwijl ionische, hydrofobe en elektrostatische interacties macromoleculen aan de nylonmembranen binden.

Eiwitbindingscapaciteit

De eiwitbindende capaciteit van nitrocellulosemembraan is 80-250 g/cm² terwijl de eiwitbindende capaciteit van nylonmembraan 150-200 g/cm. is².

Conclusie

Nitrocellulosemembraan is een bros membraan dat voornamelijk wordt gebruikt om eiwitten te immobiliseren bij Western-blotting, terwijl nylonmembraan een sterk membraan is dat voornamelijk wordt gebruikt om nucleïnezuren te immobiliseren. De nitrocellulosemembranen binden moleculen door hydrofobe interacties, terwijl de nylonmembranen moleculen binden door elektrostatische interacties. Daarom is het belangrijkste verschil tussen nitrocellulose en nylonmembraan de affiniteit.

Verwijzing:

1. "Nitrocellulosemembranen voor Western Blotting | Thermo Fisher Scientific – LK.” Thermo Fisher Scientific, Thermo Fisher Scientific, hier beschikbaar2. "Biodyne A nylon membraan, 0,45 m, 8 cm x 12 cm." Thermo Fisher Scientific, Thermo Fisher Scientific, hier beschikbaar3. "Biodyne B nylon membraan, 0,45 m, 8 cm x 12 cm." Thermo Fisher Scientific, Thermo Fisher Scientific, hier beschikbaar

Afbeelding met dank aan:

1. "Blot-biologie" door Gbdivers - Eigen werk (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia2. "Southern blot-membraan" door Bojan Žunar - Eigen werk (CC BY-SA 4.0) via Commons Wikimedia