De grootste verschil tussen de C8- en C18-kolom in HPLC is dat: de C8-kolom bevat octyl-koolstofketen (C8)-gebonden silica als de stationaire fase, maar de C18-kolom bevat octadecyl-koolstofketen (C18)-gebonden silica. Verder is de C8-kolom minder hydrofoob en heeft deze een lagere dichtheid, maar de C18-kolom is meer hydrofoob en heeft een hoge dichtheid. Daarom heeft de C8-kolom een ​​lage retentietijd, terwijl de C18-kolom een ​​hoge retentietijd heeft. En dus is de scheiding van de C8-kolom laag, maar geeft de C18-kolom een ​​hogere scheiding.

Kort gezegd zijn C8 en C18 twee soorten alkylgroepen met een rechte keten die worden gebruikt voor de oppervlaktemodificatie van silica in de omgekeerde-fasechromatografie van HPLC. De omgekeerde-fasechromatografie maakt gebruik van een waterige, matig polaire mobiele fase.

C8-kolom, C18-kolom, HPLC, hydrofobe stationaire fase, omgekeerde-fasechromatografie

Wat is C8-kolom in HPLC

C8-kolom is een type kolom dat wordt gebruikt in de omgekeerde-fasechromatografie. In het algemeen gebruikt de omgekeerde-fasechromatografie een hydrofobe stationaire fase. De stationaire fase van de vaste drager of de kolom bevat echter gemodificeerd silica. Hier is silica een hydrofiele stationaire fase. Bovendien bevat het alkylgroepen, covalent gebonden aan silica, waardoor een hydrofobe stationaire silicafase ontstaat. Tegelijkertijd is de mobiele fase van de omgekeerde-fasechromatografie waterig. Daarom heeft deze stationaire fase een hoge affiniteit voor niet-polaire verbindingen in het monster.

Figuur 1: Retentietijd is afhankelijk van de relatieve sterkte van de analyt-interacties met stationaire en mobiele fase

In het bijzonder bevatten C8-kolommen octylkoolstofketens met acht koolstofatomen als de alkylgroepen voor de modificatie van de silicakolom. En deze koolstofketens zijn relatief kort. Daarom vermindert deze kortheid de hydrofobiciteit en de dichtheid van de stationaire fase. Daarom is de retentietijd van de niet-polaire verbindingen in de C8-kolom laag, wat een mindere mate van scheiding geeft.

Wat is C18-kolom in HPLC

C18-kolom is de goedkoopste en de meest voorkomende vorm van kolommen in de omgekeerde-fasechromatografie. Bovendien zijn het type alkylgroepen dat bij de modificatie wordt gebruikt, octadecyl-koolstofketens in de C18-kolom. Ter vergelijking: de koolstofketen is langer. Ook is de dichtheid van de kolom hoger in de C18-kolom vanwege het hogere aantal koolstoffen in de alkylgroep. Dienovereenkomstig is de hydrofobiciteit van de C18-kolom ook hoog. Het maakt de retentietijd voor de niet-polaire verbindingen dus langer, wat een betere scheiding oplevert. Ook vermindert het de tailing van de scheidingscurve.

Figuur 2: HPLC-kolom

Overeenkomsten tussen C8- en C18-kolom in HPLC

Verschil tussen C8- en C18-kolom in HPLC

Definitie

C8-kolom verwijst naar een type kolom dat wordt gebruikt in de omgekeerde-fasechromatografie, met octylsilaan als stationaire fase, terwijl de C18-kolom verwijst naar een ander type kolom dat wordt gebruikt in de omgekeerde-fasechromatografie, met octadecylsilaan als stationaire fase.

Type alkylgroepen

C8-kolom bevat een octylketen, maar de C18-kolom bevat een octadecylketen.

Structuur

De structuur van de C8-kolom is OH-Si-C8, terwijl de structuur van de C18-kolom OH-Si-C18 is.

Koolstoflengte:

C8-kolom heeft een korte koolstofketen, maar de C18-kolom heeft een lange koolstofketen.

Hydrofobiciteit

C8-kolom is minder hydrofoob, maar de C18-kolom daarentegen is meer hydrofoob.

Dichtheid

C8-kolom is minder dicht, maar de C18-kolom is dichter.

Retentietijd

C8-kolom heeft een lage retentietijd, maar de C18-kolom heeft een hoge retentietijd.

ontwijking

Monster elueert snel in de C8-kolom, maar het monster elueert langzaam in een C18-kolom.

Graad van scheiding

C8-kolom geeft een relatief lage scheiding, maar de C18-kolom geeft een grotere scheiding.

Soorten monsters

C8-kolom scheidt kleine organische verbindingen beter, terwijl de C18-kolom vetzuren met lange ketens goed scheidt.

Conclusie

C8-kolom is een van de kolommen die in HPLC in de omgekeerde fase worden gebruikt. Over het algemeen bevat het octyl-koolstofketens, die korter zijn. Daarom is de hydrofobiciteit relatief laag. Dit maakt ook een lage retentietijd van niet-polaire moleculen in de kolom. Daarom zijn C8-kolommen beter voor de scheiding van kleine organische verbindingen. Daarentegen is de C18-kolom de meest voorkomende vorm van kolommen in HPLC met omgekeerde fase. Het bevat echter octadecyl-koolstofketens, die langer zijn. Daarom zijn de hydrofobiciteit, evenals de dichtheid van de stationaire fase, hoog. Daardoor zijn de retentietijd en de scheidingsgraad hoog in de C18-kolom. Het belangrijkste verschil tussen de C8-kolom en de C18-kolom in HPLC is dus het type aanwezige alkylgroepen en de retentietijd.

Referenties:

1. "High-performance vloeistofchromatografie." Wikipedia, Wikimedia Foundation, 1 februari 2020, hier beschikbaar.

Afbeelding met dank aan:

1. "Reverse Phase Gradient Elution Schematic" door Nategm - Eigen werk (CC BY-SA 4.0) via Commons Wikimedia 2. "Hplc kolom jsw" door Imgupl - Eigen werk (Public Domain) via Commons Wikimedia