De grootste verschil tussen normale fase en omgekeerde fase chromatografie is dat: normale fase chromatografie heeft een zeer polaire stationaire fase en een niet-polaire mobiele fase, terwijl omgekeerde fase chromatografie een niet-polaire stationaire fase en een polaire mobiele fase heeft. Verder is de stationaire fase van de normale fase chromatografie hoofdzakelijk zuiver silica, en de mobiele fase is een niet-waterig oplosmiddel zoals chloroform, terwijl de stationaire fase van de omgekeerde fase chromatografie een gemodificeerd silica substraat is met lange hydrofobe lange ketens en de mobiele fase fase is voornamelijk water, methanol of acetonitril.

Normale en omgekeerde fasechromatografie zijn twee soorten HPLC-methoden (high-performance liquid chromatography) die onder hoge druk werken. Over het algemeen hebben ze een hoger oplossend vermogen in vergelijking met de reguliere vloeistofchromatografie.

HPLC, vloeistofchromatografie, mobiele fase, normale fasechromatografie, omgekeerde fasechromatografie, stationaire fase

Wat is normale fasechromatografie

Normale fasechromatografie is een type HPLC-techniek. Het scheidt analyten op basis van de mate van interactie met het absorptiemiddel, dat polair silica is. Daarom is de stationaire fase van dit type chromatografie hydrofiel. Het kan ook hydrofiele interacties aangaan met de hydrofiele moleculen in het monstermengsel. Over het algemeen omvatten deze interacties waterstofbinding, dipool-dipool-interacties, enz. Daarom blijven meer niet-polaire analyten langer in de stationaire fase, waardoor de retentietijd toeneemt.

Figuur 1: Normale fase- en omgekeerde-fasechromatografie - Eigenschappen

Verder is de mobiele fase in de normale fase chromatografie niet-polair en niet-waterig. Daarom spoelen niet-polaire of hydrofobe analyten in het mengsel aan het begin van het proces effectief uit met de mobiele fase. Ondertussen neemt de retentietijd van analyten af ​​met de toenemende polariteit van de mobiele fase. Verder is de slechte reproduceerbaarheid van de retentietijd het belangrijkste nadeel van normale fase chromatografie. Dit gebeurt in principe door de aanwezigheid van een laag water of protische organische oplosmiddelen op het oppervlak van silica. Dit wordt echter geëlimineerd in de omgekeerde fase-chromatografie.

Wat is omgekeerde fasechromatografie?

Omgekeerde-fasechromatografie is een type recente HPLC. Het heeft een verhoogde reproduceerbaarheid van de retentietijd in vergelijking met normale fasechromatografie. In principe wordt deze verhoging van de reproduceerbaarheid bereikt door de stationaire fase niet-polair te maken. Om dat te doen, wordt het oppervlak van de stationaire fase van silica gemodificeerd als RMe2SiCl, waarbij R een rechte alkylgroep is, zoals C18H37 of C8H17. Vanwege de niet-polaire aard van de stationaire fase hebben minder polaire analyten in het monstermengsel echter de neiging om een ​​hogere retentietijd te hebben in tegenstelling tot de normale fasechromatografie.

Figuur 2: Omgekeerde fasechromatografie - elutie

Overeenkomsten tussen normale fase- en omgekeerde-fasechromatografie

Verschil tussen normale fase en omgekeerde fasechromatografie

Definitie

Normale fasechromatografie verwijst naar een scheidingsmethode die de verdeling van componenten van een mengsel tussen twee fasen mogelijk maakt, waarvan er één een polaire stationaire fase is terwijl de mobiele fase niet-polair is. Omgekeerde fasechromatografie daarentegen verwijst naar de scheidingsmethode, waarvan de mobiele fase meer polair is dan de stationaire fase.

Evolutie

Normale fasechromatografie werd in de jaren 70 ontwikkeld in de vorm van vloeistofchromatografie. Maar reverse-phase chromatografie is een recent ontwikkelde vorm van HPLC.

Stationaire fase

Verder gebruikt normale fasechromatografie een polaire stationaire fase, die voornamelijk zuiver silica is, terwijl omgekeerde fasechromatografie een niet-polaire stationaire fase gebruikt, wat een gemodificeerd silicasubstraat is met lange hydrofobe lange ketens.

Mobiele fase

Normale fasechromatografie gebruikt een niet-polair, niet-waterig oplosmiddel als de mobiele fase, die voornamelijk chloroform is, terwijl omgekeerde fasechromatografie een polaire mobiele fase gebruikt, die voornamelijk water, methanol of acetonitril is.

Soorten scheiding

Analyten in de mobiele fase

In de normale fasechromatografie draagt ​​de mobiele fase niet-polaire analyten aan het begin van de scheiding, terwijl in de omgekeerde fasechromatografie de mobiele fase polaire analyten draagt.

De retentietijd verlengen

Een niet-polaire mobiele fase verhoogt de retentietijd van normale-fasechromatografie, terwijl een polaire mobiele fase de retentietijd van omgekeerde-fasechromatografie verlengt.

elutie

Analyten kunnen worden geëlueerd door de polariteit van de mobiele fase in de normale-fasechromatografie te verhogen, terwijl de analyten kunnen worden geëlueerd door de polariteit van de mobiele fase in de omgekeerde-fasechromatografie te verlagen.

Kenmerken van de stationaire fase

De stationaire fase van de normale fase chromatografie bevat een laag water of protisch organisch oplosmiddel, terwijl de stationaire fase van de omgekeerde fase chromatografie geen water of een laag protisch oplosmiddel bevat.

Reproduceerbaarheid van de retentietijd

Schade aan de kolom

De kolom van chromatografie met normale fase is gemakkelijk te beschadigen, terwijl de kolom van chromatografie met omgekeerde fase moeilijk te beschadigen is.

Conclusie

Normale fasechromatografie is een type HPLC dat een polaire stationaire fase en een niet-polaire mobiele fase gebruikt. Als gevolg hiervan bewegen niet-polaire analyten van het mengsel gemakkelijk uit de kolom terwijl de scheiding van polaire analyten mogelijk is op basis van de mate van interactie met het absorbens van de stationaire fase. Aan de andere kant is chromatografie met omgekeerde fase een type recente HPLC, dat een niet-polaire stationaire fase en een polaire mobiele fase gebruikt. Daarom bewegen polaire analyten samen met de mobiele fase uit de kolom, waardoor niet-polaire analyten kunnen worden gescheiden op basis van de mate van interactie met de stationaire fase. Daarom is het belangrijkste verschil tussen normale en omgekeerde fasechromatografie het type stationaire en mobiele fasen.

Referenties:

1. "HPLC-scheidingsmodi." Wateren, hier beschikbaar.

Afbeelding met dank aan:

1. "HILIC-gebruik en voordelen" door Chem461S16Group4 - Eigen werk (CC BY-SA 4.0) via Commons Wikimedia 2. "Reverse Phase Gradient Elution Schematic" door Nategm - Eigen werk (CC BY-SA 4.0) via Commons Wikimedia